Karbohydrat fermenteringstest på bakterier for å finne ut deres evne til å gjære karbohydrater

Karbohydrat Fermentation Test på bakterier for å finne ut deres evne til å gjære karbohydrater!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å gjære karbohydrater, spesielt sukkerarter. Blant dem kan hver bakterie gjære bare noen av sukkene, mens den ikke kan gjær de andre.

Således kan sukkene, som en bakterier kan gjære og sukkene, som det ikke er karakteristisk for bakteriene.

Karbohydratgæringstesten utføres for å teste, separat bakteriernes evne til å fermentere sukkerarter som glukose, sukrose, laktose, maltose og xylose, samt deres alkoholholdige derivater som aesculin, salicin, adonitol, dulcitol og sorbitol. Hvis bakteriene kan gjære et sukker eller sukkerderivat, produseres syre, noe som reduserer pH-verdien som forandrer fargen på bromokresolpara fra lilla til gul.

Videre, hvis det er en "aerogen bakterie", produseres både syre og gass (C02), mens det er ananaerogen bakterier, produseres bare syre uten gass. Produksjon av gass er indikert ved akkumulering som en boble i et omvendt Durham-rør (et miniatyrrør).

I karbohydrat-fermenteringstesten dyrkes testbakteriene i et kjøttmedium som inneholder et av sukkerene eller sukkerderivatene og bromokresol-lilla. Et omvendt Durham-rør holdes nedsenket i det.

Hvis bakteriene "har evne til å gjærse sukker eller sukkerderivatet, endrer fargene på buljongen fra lilla til gul. Hvis gassakkumulering settes som en boble i Durham-røret, er det en akrogen bakterier, mens det ikke er noen anaerogene bakterier hvis det ikke oppstår gassakkumulering.

Materialer som kreves:

Testrør, Durham-rør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, karbohydratbuljong (kjøttkraft som inneholder de spesifikke sukker- eller sukkerderivater som glukose, sukrose, laktose, maltose, xylose, aesculin, salicin, adonitol, dulcitol, sorbitol etc.), isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene av karbohydratbuljongmedium (inneholdende det nødvendige karbohydrat og bromokresolpurpur som hovedkomponentene) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved å riste og hvirvle (figur 7.8).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 8 ved bruk av 0, 1N HC1 hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen fordeles i fem reagensrør (ca. 10 ml hver).

4. Et Durham-rør settes i omvendt tilstand inn i buljongen i hvert reagensrør. Durham-rørene inneholder luft i dem og flyter. Under sterilisering forskyver varm damp denne luften, på grunn av hvilken de domper i buljongen. Dermed er det ikke nødvendig å fjerne luft fra Durham-rørene ved å fylle dem med buljongen før sterilisering for å holde dem nedsenket i buljongen.

5. Testrørene er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav. Alternativt steriliseres 90 ml av det basale mediumet (medium uten karbohydratet) i autoklaven, og etter dette tilsettes 10 ml karbohydratoppløsning (10%) sterilisert ved membranfiltrering etter avkjøling. Dette er spesielt viktig for varmefølsomme karbohydrater, som gjennomgår nedbrytning under varmsterilisering.

7. Kjøttboksene får lov å avkjøles til romtemperatur.

8. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyf sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

9. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.