Katalasertest på bakterier for å finne ut deres evne til å nedbryte hydrogenperoksid (med figur)
Katalasertest på bakterier for å finne ut deres evne til å nedbryte hydrogenperoksid (med figur)!
Prinsipp:
Noen bakterier har evne til å nedbryte hydrogenperoksid (H 2 0 2 ) til vann (H 2 O) og oksygen (0, ↑), da de kan produsere enzymet katalase.
Nedbrytningen av hydrogenperoksid med katalase er indikert av bobler av fri oksygengass (0, ↑).
I katalasetesten blir en sløyfe av testbakteriene satt inn i en dråpe hydrogenperoksid tatt på et lysbilde. Hvis bakterien har evnen til å produsere katalase, bryter den hydrogenperoksid (H 2 O 2 ) til vann og oksygen. Produksjon av oksygen resulterer i å boble eller skumme, noe som kan bli lagt merke til i dråpen.
Materialer som kreves:
Slides, bibulous paper, inoculating loop, bunsen brenner, laminar flow kammer, hydrogenperoksid (3%), isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.
Fremgangsmåte:
1. Et lysbilde rengjøres under kranvann (Figur 7.18).
2. Lysbildet er tørket med bibulous papir og lufttørket.
3. En dråpe hydrogenperoksid (3%) tas i midten av lysbildet.
4. En sløyfe av testbakteriene tas aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe og settes inn i dråpen hydrogenperoksid på glidebanen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.
observasjoner:
1. Boblende eller skumdannelse oppstår i dråpen: Catalase positiv.
2. Boblende eller skummende forekommer ikke i dråpen: Catalase negativ.
forholdsregler:
En kultur av bakterier fra blod agar medium kan ikke brukes til katalasertest, da blod inneholder katalase og det gir alltid positivt resultat. Katalase negative bakterier har en tendens til å dø i sukkerfrie medier, enten fordi de produserer H 2 0 2 eller fordi H 2 0 2 akkumuleres i media når de utsettes for luft og lys.
Derfor bør lagerkulturer av slike bakterier lagres i mørket og hvor tilgangen til luft er begrenset. Catalase finnes i nesten alle bakterier som kan vokse aerobisk. Ettersom enzymet kun produseres av levedyktige bakterier, kan kulturer over 24 timer ikke brukes til katalasertest.