Koagulasetest på bakterier for å finne ut deres evner til å koagulere blod (med figur)

Koagulasetest på bakterier for å finne ut deres evner til å koagulere blod (med figur)!

Prinsipp:

De patogene stammene til bakteriene Staphylococcus inneholder enzymkoagulasen, som virker innenfor, vertsvev for å konvertere fibrinogen til fibrin.

Fibrin-nettverket som dannes, omgir bakteriecellene eller de infiserte vevene, beskytter bakteriene mot ikke-spesifikke vertsmotstandsmekanismer, slik som fagocytose og anti-stafylokokaktiviteten i normalt serum.

Dette enzymet bidrar også til koagulering av blod i verten ved å være en forløper for det trombinlignende stoffet som koagulerer eller clots blod. Koagulasetesten utføres for å skille mellom koagulase-positiv (patogen eller virulent)) og koagulase-negativ (ikke-patogen eller avirulent) stafylokokker.

I koagulasetesten blandes en suspensjon av testarter av Staphylococcus med blodplasma, og det inokulerte plasma undersøkes deretter periodisk for fibrindannelse eller koagulering.

Klotdannelse innen fire timer tolkes som et positivt resultat og indikerer en virulent (patogen) Staphylococcus-stamme. Fraværet av koagulasjon etter 24 timers inkubasjon er et negativt resultat, som indikerer en virulent (ikke-patogen) stamme.

Materialer som kreves:

Laboratoriedyr (kanin eller marsvin), sprøyte, antikoagulant (natriumcitrat eller heparin), blodoppsamlingsrør, sentrifuge, reagensrør, glidebryter, inokuleringssløyfe, bunsenbrenner, laminarflammekammer, disponere krukke, isolerte kolonier eller rene bakteriekulturer av slekten Staphylococcus.

Fremgangsmåte:

1. Sprøyten og blodoppsamlingsrørene vaskes med oppløsning av natriumcitrat eller heparin for å forhindre koagulering av blod umiddelbart etter innsamling (figur 7.24).

2. Ved hjelp av sprøyten samles blod fra laboratoriedyr som kanin eller marsvin og settes inn i oppsamlingsrørene.

3. Blodet centrifugeres ved 3000 rpm i 15 minutter i en sentrifuge.

4. Supernatanten (plasma) samles inn i et annet citrert testrør og resten (blodceller) kasseres.

(a) Slide Metode:

1. To dråper av en suspensjon av testbakteriene som tilhører slekten Staphylococcus, legges på to like oppdelte halvdeler av et lysbilde ved hjelp av en inokuleringssløyfe. En dråpe brukes som "kontroll" for å se om bakteriene selv er i klumper og den andre dråpen brukes som "test".

2. Til "testfallet" blir en dråpe innsamlet plasma tilsatt, blandet og inkubert ved romtemperatur.

3. Dråpene observeres med hver time inntil 4 timer.

(b) Tube Metode:

1. To små reagensrør er tatt. Ett testrør er merket "test" og den andre "kontrollen". I hvert reagensrør tas 0, 5 ml av bakteriesuspensjonen.

2. Til "test" -røret tilsettes 1 ml plasma, blandes og inkuberes

3. Rørene observeres med timeplasser opptil 4 timer.

observasjoner:

1. Klumper dannes: Koagulase-positiv Staphylococcus.

2. Klumper blir ikke dannet: Koagulase-negativ Staphylococcus.