Eksperiment til dyrking av dyrvirus i embryonert kyllingeg (med figur)

Eksperiment for å dyrke dyrvirus i embryonert kyllingegg!

Prinsipp:

Virus kan vokse bare i levende systemer. De kan ikke vokse i ikke-levende medier som nærings agar eller næringsvæske. Derfor kultivering deres krever vertsceller mottagelige for det spesifikke viruset.

Viruset som bakteriofag, som smitter og vokser i bakterieceller, dyrkes ved hjelp av kulturer av bakterieceller som levende system.

For eksempel dyrkes viruskolifagen (en bakteriofag) ved bruk av bakterien E. coli. I motsetning til at dyrs virus, som smitter og dyrker i dyrene av dyr, krever sårbare levende dyresystemer.

De tre levende dyresystemene som brukes til dyrking av animalske virus i laboratoriene, er som følger:

1. Følsomme dyr:

I denne teknikken får viruset som dyrkes, vokse i kroppen til et levende dyr som mus eller marsvin, som er utsatt for det viruset. Denne teknikken er ikke lenger brukt etter å ha blitt erstattet av følgende nyere, effektive og økonomiske teknikker.

2. Vevkultur:

Det er en svært sofistikert teknikk. Dyrceller som er kjent for å være mottagelige for viruset som skal dyrkes og også kjent for å formere seg raskt, isoleres først fra egnet levende vev av et dyr. Disse cellene er plassert i et glass eller plastbeholder som inneholder et ekstremt rikt næringsmedium. Cellene fester seg til overflaten av fartøyet og fortsetter å dele inntil hele overflaten er dekket med et sammenflytende monolag av celler. Dette kalles vevskultur.

Derefter inokuleres viruset som skal dyrkes i den mottakelige vevskulturen. Viruset infiserer levende celler i vevskulturen, undergraver deres metabolske maskineri og replikerer raskt, og vokser dermed kraftig i cellene.

3. Embryonated Chick Eggs:

I denne enkle og økonomiske teknikken injiseres viruset som skal dyrkes i et embryonert kyllingegg. Viruset vokser i levende kyllingegg og forårsaker sykdom i embryoet, manifestert av flere sykdomssymptomer (cytopatogene effekter) som er spesifikke for det viruset. Tilstedeværelse av disse symptomene indikerer veksten av det viruset i egget.

Materialer som kreves:

To embryonerte kyllingegg, lysestoff, tinkturjod, absorberende bomull, 70% alkohol, en liten drill, 1: 2 fortynning av Newcastle-virus, sprøyte, steril vasper, steril saltvann, petriskål, bunsenbrenner, laminarflytkammer, kast beholder, inkubator.

Fremgangsmåte:

1. To embryonerte kyllingegg er stearinlys ved hjelp av en lysende enhet for å demonstrere fosterets levedyktighet. Embryoet er levedyktig, hvis det viser bevegelse som respons på varme fra lys. Også plasseringen av luftsekken og store blodkarene bestemmes og markeres på eggskjellet under stearinlys (figur 8.7).

2. Skallet desinfiseres over luftsekken med tinkturjod og får deretter tørke. Det samme stedet er svevet med absorberende bomull gjennomvåt med 70% alkohol.

3. Spissen av en liten drill blir sterilisert ved å dyppe i 70% alkohol og deretter flamme den.

4. Ved hjelp av denne boren, blir et lite hull gjort aseptisk på skallet over luftsekken i et område vekk fra blodkarene.

5. 0, 2 ml av 1: 2 fortynningen av Newcastle-virus injiseres aseptisk i allantoisk hulrom i ett av de to eggene ved bruk av en sterilisert sprøyte. Dette gjøres ved å holde egget i vertikal stilling, setter sprøytenes nål gjennom hullet på skallet til hælen i en 45 ° vinkel, piercing luftsedemembranen og penetrerer inn i allantohulen. Dette virus-inokulerte egget fungerer som "test-egget".

6. Etter inokulering blir nålen trukket tilbake, og hullet på skallet er forseglet med steril varm vasper.

7. Ved hjelp av samme teknikk blir 0, 2 ml steril saltoppløsning podet i det andre embryonerte kyllingen, som fungerer som 'kontrollegget'.

8. Begge eggene inkuberes ved 37 ° C i 3 til 4 dager i en inkubator med riktig fuktighet.

9. Observasjonene blir notert hver dag.

10. Når døden er bestemt, blir embryoen løsnet fra skallet og innholdet helles i en petriskål og igjen observert.

11. Alle forurensede materialer kastes i et beger som inneholder blekepulver.

observasjoner:

1. Eggene lyser hver dag under inkubering og observeres for embryonal død som vist ved bevegelse, noe som vanligvis skjer 3 til 4 dager etter inokulering av viruset.

2. Når døden er bestemt, blir embryoen løsnet fra skallet og innholdet helles i en petriskål. Det observeres for nekrotiske skader og tegn på blødning.

3. Kontroll-egget undersøkes for bevis på cytopatogene effekter.

4. Observasjonene er registrert i tabell 8.2.