Eksperiment for identifisering av ukjente bakterier (med figur)

Eksperiment for identifisering av ukjente bakterier!

Prinsipp:

Identifikasjon av ukjente bakterier er et av de viktigste ansvarene til mikrobiologene. Prøver av blod, vev, mat, vann og kosmetikk undersøkes daglig i laboratorier over hele verden for tilstedeværelse av forurensende mikroorganismer.

I tillegg er industrielle organisasjoner kontinuerlig screening materialer for å isolere nye antibiotika-produserende mikrober eller mikrober som vil øke utbyttet av markedsførbare produkter, som vitaminer, løsemidler og enzymer. Når de er isolert, må disse ukendte mikrober identifiseres og klassifiseres.

Vitenskapen om klassifisering kalles taksonomi og omhandler separasjon av levende organismer i sammenhengende grupper. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. utgave, er den offisielle taksonomiske nøkkelen som inneholder ordrer, familier, slægter og arter av alle kjente klassifiserte bakterier (Vedlegg III).

Med grunnleggende kunnskap i fargemetoder, isolasjonsteknikker, bakteriell ernæring, biokjemiske aktiviteter og vekstegenskaper hos bakterier, blir det lettere for identifisering av ukjente bakterier.

Egenskaper for få bakterier er gitt i tabell 7.2. Andre bakterier kan identifiseres på lignende måte basert på observasjoner og resultater oppnådd etter eksperimentelle prosedyrer.

Materialer som kreves:

Slides, hulrom, petriskål, koniske flasker, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, næringsvæske, nærings agar, gramfargingsreagenser, media og reagenser for biokjemiske tester, sammensatt mikroskop, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Gramfarging av de ukjente bakteriene utføres. Foruten gramfarging er dess morfologi og arrangement også registrert. Motilitetstest av bakteriene bestemmes ved å henge dråpepreparasjon (figur 7.25).

2. Ved hjelp av steril inokuleringsteknikk inokuleres bakteriene i to nærings agar skråninger, en næringsbuljongrør og til en nærings agarplate ved hjelp av strek-inokulering. Etter inkubering brukes en skråkultur til å bestemme de kulturelle egenskapene til de ukjente bakteriene.

Den andre er brukt som en lagerunderkultur, hvis det skulle være nødvendig å gjenta noen av testene. Vekstkarakteristikker observeres også i buljongrøret og koloniegenskapene på platen.

3. Utøve omsorg i steril teknikk, for ikke å forurense kulturer og derved få uønskede resultater, blir bakteriene inokulert i respektive medium for å utføre de forskjellige biokjemiske tester.

4. Inokulerte medier inkuberes ved de nødvendige temperaturer i de nødvendige lengdene.

observasjoner:

1. I gramfarging, i tillegg til gramreaksjonen, registreres også bakteriens morfologi og arrangement.

2. De bakterielle egenskapene til bakteriene i næringsbuljong, på agar-skrå og på næringsmiddel-agarplaten er notert.

3. Resultater av de biokjemiske reaksjonene registreres.

Tolkning av resultater:

1. Ved hjelp av de ovennevnte registrerte dataene (For eksempel, se tabell 7.1) og ved hjelp av Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, er bakteriene identifisert som slektninger og arter. Det bør holdes oppmerksom på at resultatene kan variere avhengig av stammer av hver art som brukes og hvor lang tid bakteriene har blitt opprettholdt i lagerkultur.

De observerte resultatene kan ikke være helt identiske med de forventede resultatene. Derfor er de bakteriene som passer best for resultatene valgt. Identifikasjonsegenskapene til få bakterier har gitt i tabell 7.2.

2. Alternativt, ved å bruke de overopptatte dataene, oppgis kodenumre for de registrerte resultatene (se tabell 7.3) og bakteriene identifiseres enkelt ved hjelp av dataprogram som er tilgjengelig for Apple II, IBM PC eller TRS-80.

Programmet er utformet for å identifisere de ukjente bakteriene på grunnlag av prosentandel av likhet mellom de ukjente bakteriene og de kjente bakteriene med hensyn til de ovennevnte observasjonene.

Slik starter du programmet for Apple II eller IBM-PC:

(a) Skiven settes inn i den venstre stasjonen.

(b) Datamaskinen er slått på.

(c) Programinstruksjonene følges ved å skrive svarene, ukjent bakterienummer og kodenumre ettersom spørsmålene vises på skjermen.

For å starte programmet for TRS-80:

(en) Datamaskinen er slått på.

(B) Platen er satt inn i den nedre stasjonen.

(C) Oransje knappen er trykket.

(D) Når du blir spurt, blir "dato (MM / DD / ÅÅÅÅ)" oppgitt.

(E) Oransje-knappen trykkes på nytt.

(f) Programinstruksjonene følges ved å skrive inn svarene, ukjent bakterienummer og kodenumre etter hvert som spørsmålene vises på skjermen.

E. Automatiserte metoder for identifisering av ukjente bakterier:

Identifisering av ukjente bakterier ved manuell metode ved bruk av fargereaksjoner, motilitetstest, kulturelle egenskaper og biokjemiske tester er en tungvint, langvarig og tidkrevende prosess. For å gjøre prosessen enkel og kort, har automatiske metoder blitt utviklet.

Disse metodene bruker i utgangspunktet de samme biokjemiske tester som brukt i de manuelle metodene, men her er det utført på en automatisk måte, og tolkningen er utført med et datamaskinstøttet program.

To slike systemer som for tiden brukes for automatisk identifisering av bakterier, er gitt som følger:

1. MINI API-system

2. VITEK 2 System

F. Videre bekreftelse:

(1) Serologiske undersøkelser:

Serologiske tester kan utføres for ytterligere bekreftelse av de identifiserte bakteriene. Til en suspensjon av de identifiserte bakteriene (si X) blandes en dråpe av antiserumet (anti-X) mot den bakterien. Hvis det resulterer i dannelse av klumper eller nedbør (X-anti-X-kompleks), blir identifikasjonen bekreftet.

Antisera for forskjellige bakterier er kommersielt tilgjengelig. De produseres kommersielt i forskjellige laboratorier. Antiserum av spesielle bakterier produseres ved å injisere døde eller demperte celler av disse bakteriene (si X) i et laboratoriedyr.

Som forsvarsmekanisme produserer vertsdyret antistoffer (anti-X) mot den bakterien som forblir i blodet. Blodet samles fra dette dyret og dets serum isoleres ved spesielle teknikker. Dette serumet, som inneholder antistoff mot den bakterien, kalles antiserum av den bakterien.

(2) PCR-test:

Polymerase Chain Reaction (PCR) testen er en rask molekylær metode for bekreftelse av de identifiserte bakteriene. Denne teknikken brukes ofte for å påvise ulike bakterier og virus raskt og presist.