Eksperiment: Motilitetstest av bakterier: ved å henge dråpeforberedelse (med figur)

Målet å utføre motilitetstest av bakterier, ved å henge dråpeforberedelse, for å finne ut om det er motil eller ikke-motil.

Hensikt:

Motilitet betyr bevegelsesevne ved egen kraft. Basert på motilitet, kan bakterier deles inn i to grupper som følger.

(1) Motile Bakterier:

En bakterie, som har den indre bevegelsesevne i det omgivende medium, hvor den forblir suspendert, er en motil bakterier.

(2) Ikke-motile bakterier:

En bakterie, som ikke har den indre bevegelsesevne i det omgivende medium, hvor den forblir suspendert, er en ikke-motil bakterie. Ikke-motile bakterier kan vise tilsynelatende motilitet som følge av deres brune bevegelse forårsaket av bombardement av vannmolekylene i det omgivende medium på bakteriecellene.

I våtfeste, selv om formen og størrelsen på bakterier kan observeres, kan motiliteten bli hemmet, da suspensjonen presses mellom glidebanen og dekslet. Det er hvorfor; Hengende dråpeforberedelse eller motilitetstest utføres for tydelig observasjon av bakteriens motilitet, i tillegg til form og størrelse. Det er nyttig ved identifisering av bakterier.

Prinsipp:

En svært liten dråpe bakteriesuspensjon henges fra midten av et dekselglass inn i hulrommet til et hulrør. Den hengende dråpen observeres under et mikroskop ved bruk av olje-nedsenkningsmål. Hvis bakteriene er motile, kan cellene sees å ha uregelmessig bevegelse i omgivende medium.

I kontrast, hvis det er ikke-motilt, forblir cellene sine statiske i mediet uten bevegelse eller kan vise brunisk bevegelse som følge av bombardementet av vannmolekylene i mediet på bakteriecellene.

Materialer som kreves:

Hule glidelås, dekselglass, vaselin eller vaselin, nedsenkningsolje, 24-timers gammel buljongkultur av bakterier, sløyfe og mikroskop (sammensatt, mørkfelt eller fasekontrast).

Fremgangsmåte:

1. Et hulrør skylles ordentlig under kranvann, slik at vann ikke forblir som dråper på overflaten. En hulrute er et glassrute med en liten runde depresjon i midten, hvor en liten dråpe bakteriesuspensjon kan henge (figur 5.3).

2. Lysbildet tørkes ved å tørke med bibulous papir og deretter flytte det over flamme eller holde det i solen.

3. En ring av petroleumsgelé (eller vaselin) påføres rundt hulrommet.

4. En sløyfe steriliseres over flammen og avkjøles. En lapful av bakteriesuspensjon blir tatt fra den 24-timers gamle buljongkulturen aseptisk. En liten dråpe av suspensjonen er plassert midt på et deksel. Kjøttkulturen bør ikke være mer enn 24 timer gammel, fordi bakterier kan miste sin motilitet, ettersom de blir eldre.

5. Hulruten er omvendt og plassert på dekselet, slik at hulrommet dekker dråpen.

6. Glidebryteren og dekselet presses forsiktig sammen, slik at hulrommet er forseglet. Det må tas hensyn til at ingen del av hulrommet berører dråpen.

7. Lysbildet er omvendt raskt, slik at dråpen henger inn i hulrommet uten å berøre det.

8. Lysbildet er klippet til mikroskopets stadium.

9. Kanten på dråpen er fokusert under lavt effektmål.

Årsakene til å fokusere kanten på dråpen er som følger:

(a) Bedre kontrast oppnås på grunn av forskjell i brytningsindeksen til dråpen og dekslet.

(b) Når dråpen henger, tynner den mot kanten, for hvilken kanten inneholder mindre antall bakterier som skal observeres tydelig for motilitet.

10. En dråpe neddypningsolje legges på dekselet rett over hengende dråpe og kanten av hengende dråpe observeres under oljemålsmål for mikroskopet. Fortrinnsvis bør et faskontrast- eller mørkfeltmikroskop brukes for klar observasjon.

Observasjoner (Under Oljedempingsmål):

1. Motilitet:

Motile eller ikke-motile

2. Formen av bakterier:

Sfærisk (kokkus)

Stangformet (baciller)

Comma-like (vibrio)

Spiral (spiroketene)

3. Arrangement av bakterier:

Par (diplobacillus / diplococcus)

I fours (tetrads)

I kjeder (streptokokker / streptobacillus)

Drue-lignende klynger (stafylokokker)

Cuboidal (sarkin eller oktett).

4. Størrelse på bakterier:

Ved øyeberegning gjør du tegning av feltet under olje-nedsenkningsmål.

(3) Farging:

Formål med farging:

Brekningsindeksen til bakterieceller er svært nær det for vann, hvor de suspenderes under observasjon og også til glassplaten, som de observeres under mikroskop. Derfor er det svært vanskelig å observere dem tydelig.

For å overvinne denne vanskeligheten, er cellene fargede av flekker som gir dyp farge til cellene og lysfarge til det omgivende medium, der de er suspendert. De dype cellene får en klar kontrast mot den lyse bakgrunnen og kan observeres tydelig.

Farging er således en metode for å gi farge til de ellers fargeløse transparente mikroorganismer ved hjelp av forskjellige biologiske fargestoffer som kalles "flekker" for deres mikroskopiske observasjon.

Kjemikk av flekker:

Fargestoffer er av tre typer som følger:

1. Fargestoffer:

De brukes til farging av generelle formål som for farging av tekstilmaterialer og for farging av vegger.

2. flekker:

De brukes til farging av biologiske eller mikrobiologiske prøver. Disse er mer nøyaktige og krevende.

3. Indikatorer:

De er kjemikalier, som forandrer farge med endring i hydrogenjonskonsentrasjon (pH).

Selv om "flekk" er den passende termen, brukes begrepet "fargestoff" i stor grad i mikrobiologi for å bety farvestoffer. Tidligere ble naturlige fargestoffer fremstilt fra forskjellige planter. De har blitt mye erstattet av syntetiske fargestoffer.

Som det første syntetiske fargestoffet ble fremstilt fra anilin, kalles alle syntetiske fargestoffer "anilinfarger". Imidlertid er de fleste av disse fargestoffene nå produsert av kulltjære som de nå kalles for "kulltærfarger". Kulltærfarfarene er benzenderivater. Et fargemolekyl består av tre komponenter (figur 5.4) som vist nedenfor.

(a) En benzenring

(b) En kromoforgruppe

Benzen er et organisk fargeløst løsningsmiddel, mens kromoforen er fargekomponenten i fargestoffet. Benzen kombinerer med kromoforen for å danne kromogen (figur 5.5). Som kromogen ikke har egenskapen å dissociere, kan den ikke kombinere med cellene og vaskes lett bort.

Når et kromogen kombineres med en aokromtrom, dannes et fargestoff eller flekk. Aokrometrom gir elektrolytisk dissosieringsegenskap (saltdannende egenskap) til fargestoffet. Således er kjemisk en flekk definert som en organisk forbindelse inneholdende en benzenring, en kromoforgruppe og en auxokromgruppe.

Typer av fargestoffer:

Farging av bakterier er av forskjellige typer som beskrevet nedenfor (figur 5.6).

I. Enkel farging:

Her er bare en flekk brukt. Denne fargen brukes til å observere form (kokos, baciller, vibrio, spirilli) og arrangement (enkelt, par, tetrad, kjede, klynge) av bakterier.

Det er av to typer som følger:

A. Grunnfarget:

Ved grunnfarging brukes en grunnfarge, som metylenblå, krystallviolett eller karbolfuchsin, til å flekke bakteriecellene. Flekken binder seg tett til bakteriecellene og gir en dyp farge av flekken til cellene, mens det omgivende mediet får en lett farge på flekken.

B. Syrestoff:

Ved sur farging brukes en sur flekk, som eosin eller nigrosin, til å fargelegge bakteriecellene negativt. Flekken gjør omgivelsene farget, mens bakteriecellen forblir fargeløs.

II. Differensialfarging:

Her brukes mer enn en flekk. Det utføres for følgende formål.

A. Separasjon i grupper:

Disse differensielle fargemetoder utføres for å skille bakterier i forskjellige grupper basert på deres fargekarakteristikker.

Disse metodene inkluderer følgende:

(en) Gram-farging:

Denne fargemetoden utføres for å skille mellom gram-positive og gram-negative bakterier.

(b) Syr-hurtig farging:

Det utføres for å skille mellom syrefaste og ikke-syrefaste bakterier.

B. Visualisering av spesifikke strukturer av bakterier:

Disse differensielle fargemetoder utføres for å visualisere spesifikke strukturelle komponenter av bakterieceller.

Disse metodene inkluderer følgende: