Hydrogen Supplied Test på bakterier for å finne ut deres evne til å produsere hydrogen (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om hydrogenstilførselsprøven på bakterier for å finne ut deres evne til å produsere hydrogen!

Prinsipp:

Noen bakterier har muligheten til å redusere svovel til hydrogensulfid. Det er en fargeløs gass som reagerer med jern (jernholdige salter) for å produsere svarte utfelter av jernsulfid.

Det reagerer også med blyacetat for å produsere svarte utfelter av blysulfid. Hydrogen sulfid test (H, S test) kan gjøres på to måter, basert på svovelkilden.

De er som følger:

(Jeg) H ₂ S-test ved bruk av uorganisk svovelkilde

(Ii) H ₂ S test ved hjelp av organisk kilde til svovel

(i) H ₂ S-test ved bruk av uorganisk kilde til svovel:

I denne testen blir testbakteriene dyrket på trippel sukkerjern-agar-skråninger (TSI-agar-skråninger), som inneholder glukose, sukrose, laktose, fenolrød, natriumtiosulfat og jernsulfat. Hvis bakteriene benytter det uorganiske svovel (natriumtiosulfat) som brukes i mediet, produseres H ₂ S, som kombinerer med jernsulfatet i mediet for å danne svarte utfelter av jernholdig sulfid, noe som medfører endring i rumpens farge til svart .

I tillegg til bruk av uorganisk svovel, dersom bakteriene kan benytte noen av de tre sukkerarter (glukose, sukrose eller laktose), produseres syre, noe som reduserer mediumets pH. Som et resultat blir fargene på skråningen endret fra rød til gul.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrenner, laminarflammekammer, kast bort krukker, inkubator, isolerte kolonier med tredobbelte sukkerstråler (TSI agar) eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i TSI agar medium (som inneholder 3 sukkerarter og jern som hovedkomponentene) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og hvirvling (figur 7.13).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7, 4 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

3. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensrør (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. De blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå stilling for å avkjøle og størkne mediet for å få TSI-agar-skråninger.

8. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i skråene ved å stikke inn i rumpen og strekke på overflaten av skråene ved hjelp av en flamme-sterilisert nål. Nålen steriliseres etter hver inokulasjon.

9. De inokulerte skinnene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.

observasjoner:

1. Farge på butt endrer seg til svart: H ₂ S positiv.

2. Farge på rumpen endres ikke til svart: H ₂ S negativ.

(ii) H ₂ S-test ved hjelp av organisk kilde til svovel

I denne testen blir testbakteriene dyrket i cysteinbuljong, som inneholder cystein som den organiske svovelkilden. Hvis bakteriene bruker det organiske svovelet (cystein) som brukes i mediet ved hjelp av sitt enzym 'cystein desulfurase', er H2S produsert. Denne H ₂ S kombinerer med blyacetatet gjennomvåt i et papir for å danne svarte utfelter av blysulfid, noe som medfører endring i fargen på papirstrimlen til svart.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, cysteinbuljong, Whatman filterpapirstrimler, blyacetatoppløsning (mettet), isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene av cystein-buljongmedium (som inneholder cystein som hovedkomponent) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av buljongen, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvling ( Figur 7.14).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7, 5 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen er fordelt i fem reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørene blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Kjøttboksene får avkjøles til romtemperatur.

6. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyfe sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

7. En liten papirstrimmel som er gjennomvåt i blyacetatoppløsning (mettet) festes til munnen av hvert reagensrør på en slik måte at en lang del av den forblir inne i reagensrøret og en liten del forblir utenfor.

8. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 48 timer i en inkubator.