Lipidhydrolysestest på bakterier for å finne ut deres evne til å hydrolysere lipider (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om lipidhydrolysetesten, for å finne ut en bakteriers evne til å hydrolysere lipider (fett)!

Prinsipp:

Noen bakterier har evne til å hydrolysere lipider (fett) til glyserol og fettsyrer, da de har lipolytisk enzym 'lipase'.

Disse bakteriene kalles lipolytiske bakterier. Selv om lipidene danner en emulsjon, danner de ikke hydrolyserte sluttprodukter, glyserol og fettsyrer, når de dispenseres i agar, dannelse av uaksens, ikke en slik emulsjon med agar, for hvilken de ikke frembringer en slik opasitet; heller gi åpenhet.

I lipidhydrolysetesten vokser testbakteriene på agarplater inneholdende tributyrin som lipidsubstratet. Tributyrin danner en emulsjon, når den blir dispensert i agar, hvilket gir et ugjennomsiktig medium.

Hvis bakteriene har evne til å hydrolysere lipider, hydrolyserer koloniene tributyrin i mediet i områdene som omgir dem til løselig glyserol og fettsyrer (smørsyre), mens resten av platene inneholder plater uten hydrolysert tributyrin.

Som et resultat dannes gjennomsiktige klare soner rundt koloniene, da de hydrolyserte produkter, glyserol og fettsyrer dannet rundt dem ikke danner emulsjon med agar. På den annen side forblir resten av platensarealene ugjennomsiktige, da det uhydrolyserte tributyrin i disse områdene danner en emulsjon med agar.

Materialer som kreves:

Petri-tallerkener, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminar-strømningskammer, disponere krukke, inkubator, tributyrinagar, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. To petri-tallerkener rengjøres, dekkes med håndflate og festes med tråd eller gummibånd (figur 7.22). Dette trinnet samt steriliseringen av petriskålene i trinn 6 utelates dersom ovnssteriliserte petriskål brukes direkte.

2. Ingrediensene av tributyrinagarmedium (unntatt tributyrin, som er lipidkomponenten) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvlende.

3. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7.2 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

4. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

5. Etter avkjøling til ca. 90 ° C tilsettes tributyrin og emulgeres i en Warring-blender.

6. Kolben er bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

7. De to petriskålene og den koniske kolben inneholdende tributyrinagarmedium steriliseres ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

8. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og får avkjøles i noen tid, uten at mediet kan størkne. Kjøling av mediet forhindrer kondensering og opphopning av vanndråper inne i platene. Hvis mediet allerede er utarbeidet og størknet under lagring, må det fortynnes ved oppvarming forsiktig til det smelter helt.

9. For å fremstille tributyrinagarplater, før det steriliserte tributyrinagarmedium avkjøles og størkner, i varm smeltet tilstand, helles den aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i de to steriliserte petriskålene (ca. 20 ml hver), slik at Det smeltede mediet dekker bunnen av petriskålene helt.

Deretter dekkes platen med dekslene og får avkjøles for å størkne mediet i dem. Tributyrin danner en emulsjon, når den dispenseres i agar, hvilket gir et ugjennomsiktig medium. Vanndamp som kan kondensere på den indre overflaten av platene og dekslene, blir fordampet ved å holde platene og dekslene i omvendt stilling i en inkubator ved 37 ° C i ca. 1 time.

10. Hver plate er merket på undersiden til fire kvartaler.

11. "Spot-inokulering" av testbakteriene gjøres aseptisk, fortrinnsvis inne i et laminært strømkammer, i midten av hvert kvartal ved å lage en flekk (eller smurt) av bakteriene ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

12. De inokulerte platene inkuberes i omvendt stilling, topp ned, ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator til kolonier av bakteriene er synlige.

observasjoner:

1. Transparente klare soner dannet rundt kolonier av bakterier: Lipidhydrolyse positiv.

2. Transparente klare soner ikke dannet rundt kolonier av bakterier: Lipidhydrolyse negativ.