Litmus Melk Test på bakterier for å finne ut deres evne til å transformere melk komponenter til sluttprodukter

Litmusmælkprøve på bakterier for å finne ut deres evne til å transformere melkekomponenter til sluttprodukter!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å vokse i melk og omdanne forskjellige melkomponenter til varierte sluttprodukter. Melk er en kompleks blanding av flere komponenter.

De viktigste komponentene som kan transformeres av bakterier, er melkesukkerlaktosen og melkeproteinet kasein, laktoalbumin og lakto-globulin.

Ulike bakterier har forskjellige enzymsystemer, på grunn av hvilke de virker på forskjellige komponenter og omdanner dem til varierte metaboliske sluttprodukter, som er karakteristika for bakteriene.

Laksmuskeltesten utføres for å finne ut om en bakteriers evne til å transformere forskjellige melkekomponenter, som manifesterer seg som endring i fargen på litmus, produksjon av gass, ostemasseformasjon etc. Litmus er en indikator for pH-indikator og oksydasjonsreduksjon som endrer farge avhengig av kjøttens tilstand.

I litmusmelk-testen blir testbakteriene dyrket i et kjøttmedium som inneholder melk og lakmus. Hvis bakteriene har muligheten til å transformere forskjellige melkomponenter til varierte sluttprodukter, vokser det i buljongen og forvandler komponentene på forskjellige måter avhengig av enzymsystemene.

De seks viktigste transformasjonene, som kan observeres i litmusmælk som følge av bakterielle aktiviteter, er som følger:

(i) Laktosefermentering

(ii) Gassdannelse

(iii) Litmusreduksjon

(iv) gjengdannelse

(v) Proteolyse (peptonisering)

(vi) Alkalisk reaksjon

(i) Laktosefermentering:

Bakterier som er i stand til å bruke laktose som kullkilde for energiproduksjon, bruker det inducerbare enzymet p-galaktosidase og nedbryter laktose til glukose og galaktose. Glukose blir ytterligere forringet gjennom Embden-Meyerhof-banen til pyruvinsyre, som i sin tur omdannes til melkesyre. Akkumulering av melkesyre reduserer pH i mediet til ca. 4, 0, på grunn av hvilken fargen på litmus endres fra lilla ved en nøytral pH til rosa ved den sure pH.

(ii) Gassdannelse:

Sluttproduktene fra bakteriell gjæring av laktose kan omfatte gasser som karbondioksid og hydrogen. Tilstedeværelsen av disse gassene kan ses som separasjoner av ostemassen eller ved utvikling av spor eller sprekker i ostemassen, da gassene stiger til overflaten.

(iii) Litmus Reduksjon:

Fermentering er en anaerob prosess som involverer oksidasjon som oppstår i fravær av molekylært oksygen. Oksidasjon kan oppstå enten ved tilsetning av oksygen eller fjerning av hydrogenion. Laktosefermentering, som er en anaerob prosess, innebærer fjerning av hydrogenion fra den.

Siden hydrogenjon ikke kan eksistere i Free State, må det være en akseptor av hydrogen ion. I litmusmeltesten virker litmus som akseptoren av hydrogenjonen. Litmus er lilla i oksidert tilstand, men når den aksepterer hydrogen, blir den redusert og blir hvit eller melkfarget.

(iv) Curd Formation:

De biokjemiske aktivitetene til forskjellige bakterier som vokser i litmusmælk, kan resultere i produksjon av to forskjellige typer ostemasse (koagulater). Curd er betegnet enten som "acid curd" eller som "rennet ostemasse" avhengig av den biokjemiske mekanismen som er ansvarlig for dens dannelse.

I tilfelle sur syre, melkesyre eller andre organiske syrer, i nærvær av kalsiumioner, forårsaker utfelling av melkeproteinet, kasein som kalsiumkaseinat for å danne en uoppløselig klump. Klumpen er vanskelig og trekker seg ikke inn fra prøvenørets vegg. En syrestamme blir lett identifisert dersom testrøret er omvendt og clot forblir immobile.

I tilfelle rennet ostemasse produserer noen bakterier rennin, et enzym som virker på kasein for å danne parakasein, som i nærvær av kalsiumioner utsettes som kalsiumparakaseinat og danner en uoppløselig klump. I motsetning til syreindikatoren, er dette en myk semisolid klump som strømmer sakte, når prøveledningen er tiltet.

(v) Proteolyse (peptonisering):

Noen bakterier, som ikke har evnen til å skaffe seg energi ved laktose-gjæring, bruker andre næringskilder som proteiner til dette formålet. Ved hjelp av proteolytiske enzymer hydrolyserer disse bakteriene melkeproteinene, hovedsakelig kasein, til deres grunnleggende byggesteiner, nemlig aminosyrer.

Lusmusen blir dyp lilla i den øvre delen av røret, mens mediet begynner å miste kropp og produserer gjennomskinnelig, brunt, mykeaktig utseende, da proteinene hydrolyseres til aminosyrer.

(vi) Alkalisk reaksjon:

En alkalisk reaksjon er tydelig når fargene på mediet forblir uendret eller endrer seg til dypblått. Denne reaksjonen indikerer den delvise nedbrytning av kasein ved bakterier i kortere polypeptidkjeder, samtidig med at alkaliske sluttprodukter frigjøres som er ansvarlige for den observerbare fargeendringen.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, litmusmælksbuljong, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i litmusmælksbuljongmedium eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvling (figur 7.12).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 8 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen er fordelt i fem reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørrørene steriliseres ved 121 ° C i 15 minutter i en autoklav.

5. Kjøttboksene får avkjøles til romtemperatur.

6. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyfe sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

7. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.