Metylrødt test for å finne ut mulighetene for bakterier til å bruke glukose (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om den metylrøde testen (MR-testen), for å finne ut en bakteriers evne til å bruke glukose med produksjon av en stabil syre som sluttproduktet!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å bruke glukose og konvertere den til en stabil syre som melkesyre, eddiksyre eller myresyre som sluttprodukt.

Disse bakteriene metaboliserer i utgangspunktet glukose til pyruvinsyre, som videre metaboliseres gjennom "blandet syrevei for å produsere den stabile syren.

Syren produsert varierer fra art til art og avhenger av de spesifikke enzymatiske veiene som finnes i bakteriene. Syren som produseres så reduserer pH til 4, 5 eller under, noe som er indikert ved en endring i fargen på metylrød fra gul til rød.

I den metylrøde testen (MR-test) dyrkes testbakteriene i et kjøttmedium som inneholder glukose. Hvis bakteriene har evne til å bruke glukose med produksjon av en stabil syre, forandrer fargene på metylrøddet fra gul til rød, når de blir tilsatt i buljongkulturen.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflowkammer, disponere krukke, inkubator, MR-VP-buljong (metylrød-Voges Proskauer-buljong eller glukosefosfatbuljong), metylrød løsning, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i MR-VP-kjøttmedium (som inneholder glukose som hovedkomponent) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvlende. MR-VP-kjøttkraft kalles også glukosefosfatbuljong (figur 7.4).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 9 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen er fordelt i fem reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørene blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Kjøttboksene får avkjøles til romtemperatur.

6. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyfe sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

7. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.

8. Alkoholholdig løsning av metylrød (3-4 dråper) blir droppet inn i hvert reagensrør.

observasjoner:

1. Rød farge produsert: MR positiv (dvs. bakteriene har omdannet glukose til en stabil syre, som indikert ved omdannelse av metylrød fra gul til rød farge. Det indikerer blandet syrefermentering).

2. Rød farge ikke produsert: MR negativ (dvs. glukosen i mediet er ikke omdannet til en stabil syre. Dette indikerer butylenglykolfermentering).