Forberedelse av våt bakteriebølge for å observere dens naturlige form og størrelse

Målet er å forberede våt montering av bakterier for å observere sin naturlige form, størrelse og arrangement i levende tilstand.

Hensikt:

Bakterieceller kan sees enkelt og tydelig, når de er farget med flekker, men i de fleste fargingsprosesser dør og mister cellene deres naturlige form og størrelse på grunn av varmefiksering, samt på grunn av eksponering for kjemikalier (flekker, syre og alkohol).

Målet med dette eksperimentet er å observere den naturlige formen, størrelsen og arrangementet av bakterier i levende tilstand. Motilitet kan ikke observeres i våtmontering, da cellene presses mellom glidebryteren og dekselet.

Prinsipp:

I våtmontering legges en dråpe av bakteriesuspensjonen på et lysbilde, dekket med et dekselglass og observeres under et sammensatt mikroskop eller fortrinnsvis under et mørkfelt- eller fasekontrastmikroskop ved bruk av oljeduserende mål.

Materialer som kreves:

Glassglass, dekselglass, petroleumjell, nedsenkende olje (cedarullolje eller flytende paraffin), bakteriekultur (på fast medium eller i flytende suspensjon), sløyfe og mikroskop (sammensatt, mørkfelt eller fasekontrast).

Fremgangsmåte:

1. Et lysbilde rengjøres ordentlig under kranvann, slik at vann ikke forblir som dråper på overflaten (figur 5.2).

2. Lysbildet tørkes ved å tørke med bibulous papir og deretter flytte over flammen eller holde seg i solen.

3. Hvis bakteriene er blitt dyrket på et fast medium (som skrå kultur eller plate kultur), settes en dråpe destillert vann i midten av lysbildet. En sløyfe steriliseres ved å varme den over en flamme til rødt varmt. Den avkjøles til romtemperatur. Så, aseptisk, skrapes en liten del av bakteriekulturen av løkken og overføres til dråpevis med vann.

En suspensjon av bakterier er laget ved forsiktig å blande sløyfen av bakterier i vanndråpet, slik at dråpen ikke sprer seg. Hvis det vokser i et flytende medium som suspensjon, blir en dråpe av bakteriesuspensjonen plassert aseptisk i midten av lysbildet direkte ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe.

4. Petroleumjell eller lignende materiale påføres rundt dråpen, slik at når dekselet glir over dråpen, blir fordampning og effekt av luftstrøm minimert.

5. Et dekselglass holdes i skrå stilling nær dråpen av bakteriesuspensjon med en kant som berører glidebanen.

6. Sakte dekselet setter ned, til det berører overflaten av dråpen.

7. Dermed slippes dekselet, slik at dråpen av bakteriesuspensjon sprer seg i alle retninger under dekslet. Pass på at ingen luftboble dannes i suspensjonen.

8. Lysbildet er klippet på scenen av et sammensatt mikroskop og observert ved bruk av lavt strøm og høyt tørrmål. Deretter settes en dråpe neddypningsolje på dekselet og observeres ved hjelp av oljemålsmål for mikroskopet. Fortrinnsvis bør et faskontrast- eller mørkfeltmikroskop brukes for klar observasjon.