Krav til dyrking av bakterier (rikelig næringsstoffer og optimale miljøforhold)

Grunnleggende krav til dyrking av bakterier er: (I) Rikelig næringsstoffer (II) Optimale miljøforhold

Bakterier er tilstede universelt nesten overalt; i jord, luft, vann og til og med inne i munnen og tarmen av alle dyr. "Dyrking av bakterier" eller "bakteriekultur" betyr å øke disse øyeblikkene usynlige bakterier i næringsrike stoffer og passende miljøforhold, som støtter deres hurtige vekst og multiplikasjon.

Dette resulterer i manifestasjon som stor populasjon synlig for blotte øyne (som kolonier eller uklar oppblåsing). Dermed er det to grunnleggende krav til dyrking av bakterier, slik som (I) Rikke næringsstoffer og (II) Optimale miljøforhold.

(I) Rikelig næringsstoffer:

I naturen tar bakterier opp de komplekse næringsstoffene som er tilgjengelige rundt dem, etter å ha nedgradert dem til enklere former av enzymer som utskilles av dem. Men i laboratoriet økes rask vekst ved å dyrke dem i stoffer som inneholder næringsstoffer i enklere former.

Disse stoffene som inneholder tilstrekkelig mengde næringsstoffer i enklere former for rask vekst og multiplikasjon av bakterier kalles 'kulturmedier'. Det finnes en rekke kulturmedier som nå finnes med forskjellige ingredienser. Kulturmedier er oppnådd i følgende tre "fysiske former".

1. Flytende media eller buljong:

Disse er klare væsker som inneholder vann og næringsstoffer i enklere former for vekst av bakterier, som er sterilisert i autoklav. Når bakterier inokuleres i dem og inkuberes under forhold som er egnet for deres vekst, vokser de profusielt i tykke suspensjoner av bakterieceller, på grunn av hvilke media blir grumle.

2. Solid Media:

Disse er størkne stoffer, hvor flytende buljonger er blitt supplert med et størkningsmiddel som kalles "agar" på et nivå på mer enn 1%. Agar er et pulver (noen ganger kalt agar) ekstrahert av tang og er et komplekst karbohydrat som hovedsakelig består av galaktose.

Det er viktig å merke seg det; agar er et størkningsmiddel og har ingen næringsverdi for bakterier. Den tjener som et utmerket solidifiseringsmiddel, som i en vandig oppløsning det flytende ved 100 ° C og størkner ved 40 ° C. De fleste av de patogene bakteriene hos mennesker vokser ved 37 ° C (normal kroppstemperatur).

Agar smelter ikke ved denne temperaturen og gir en hard overflate. På denne næringsrike, raske, harde overflaten vokser hver enkelt bakterie, multipliserer og gir opphav til en isolert koloni av disse bakteriene. Slike isolasjon er ikke mulig i flytende medier, hvor bakterier vokser i suspensjon.

Fast agarmedium kan fremstilles i følgende former:

(a) agarplater:

Agarpulver, på et nivå på mer enn 1%, oppløses fullstendig i væskebuljong ved oppvarming. Deretter steriliseres den i en autoklav. Det forblir flytende i varm stand og størkner når den avkjøles. I den varme flytende tilstand, helles den i steriliserte petriskål (20 ml i hver petriskål) og får avkjøles slik at den danner et tykt lag på bunnen av petriskålene.

Disse petriskålene som inneholder et tykt lag av størknet agarmedium kalles 'agarplater' eller bare 'plater'. Bakterier dyrkes som isolerte kolonier på disse platene for deres oppregning og isolasjon.

Karakteristikkene til disse koloniene bidrar også til å identifisere bakterier. Petriskål er tilgjengelig i forskjellige størrelser for å møte ulike eksperimentelle forhold. For rutinemessige formål benyttes imidlertid petriskål med 15 cm diameter.

(b) Agar Slants:

For å forberede "agar-slanger" eller bare "slanger", blir agarpulver på et nivå på mer enn 1% oppløst fullstendig i flytende kjøttkraft ved oppvarming. I varm væskeform, fordeles den i reagensrør (20 ml i hvert reagensrør), bomullsplugget og sterilisert i autoklav.

Det steriliserte mediet i reagensrør får stivne i skrå stilling, for å få skråene. Slangene brukes til vedlikehold av rene stamkulturer av bakterier oppnådd ved isolering på agarplater.

Disse brukes også til vedlikehold av standard referansekartkulturer hentet fra internasjonale standardlaboratorier. Rene kulturer og standardkulturer opprettholdes ved periodisk (vanligvis 15 dager til 1 måned) overføring til friske skråninger aseptisk. Vekstkarakteristikaene på skråninger bidrar også til å identifisere bakterier.

(c) Agar Deep Tubes:

Agar-dype rør fremstilles etter samme fremgangsmåte som fulgt i fremstillingen av agar-skråninger, bortsett fra at media, etter sterilisering, får stivne i oppreist stilling. Disse brukes primært til studier av gassformige krav til bakterier.

3. Semi Solid Media:

De inneholder agar på et nivå mindre enn 1%, slik at de forblir i halvfast tilstand. De brukes til spesifikke studier.

(II) Optimale miljøforhold:

Flere miljøforhold påvirker veksten av bakterier. For å dyrke en bakterie, bør den forsynes med et sett med optimale miljøforhold. De viktigste miljøforholdene som skal tilveiebringes under dyrking av bakterier er gitt nedenfor.

1. Mediaens pH:

Hver type bakterier kan vokse innenfor et bestemt pH-område. For de fleste bakterier er dette spekteret mellom 4 og 9. Imidlertid forekommer maksimal vekst av hver bakterieart innenfor et meget smalt pH-område. Dette optimale pH-området for de fleste bakterier er 6, 5-7, 5 og for de fleste svampene er mugg og gjær 4-6, da de foretrekker sure miljøer.

For å oppnå maksimal vekst, må pH-verdien av kulturmediet justeres til denne pH under fremstillingen. Kjemiske stoffer som virker som buffere (f.eks. KH ₂ P0 ₄, K ₂ HP0 ₄ ) blir også tilsatt til mediet for å hindre eventuell skift i pH som kan oppstå på grunn av akkumulering av sure eller basale metabolske sluttprodukter produsert av bakteriene under deres vekst .

2. Inkubasjonstemperatur:

Mesofiler inkuberes ved 37 ° C, termofiler ved 55 ° C og psykofiler ved 4 ° C.