Triple Sugar Iron Test på bakterier for å finne ut muligheten til å produsere hydrogensulfid (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om trippelsukkerstesten på bakterier for å finne ut muligheten til å produsere hydrogensulfid!

Målet er å utføre trippel sukkerjernstest (TSI-test) for å finne ut om en bakteriers evne til å utnytte et eller flere av de tre sukkerene, som glukose, sukrose og laktose, samt evne til å produsere hydrogensulfid (H 2 S), noe som reduserer jern.

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å utnytte en eller flere av de tre sukkerarter som glukose, sukrose og laktose.

Hvis en eller flere av de tre sukkerene (trippel sukker) blir brukt, produseres syre, noe som reduserer pH-verdien som forandrer farge av fenolrød fra rød til gul.

Videre har noen bakterier muligheten til å produsere hydrogensulfid (H 2 S) ved å bruke svovelforbindelser. Den således produserte H 2 S kombinerer med jernforbindelsen, jernsulfat, for å danne svarte utfelter av jernsulfid.

I trippel-sukkerstest-testen (TSI-testen) blir testbakteriene dyrket på agar-slanger som inneholder glukose, sukrose, laktose, fenolrød, natriumtiosulfat og jernsulfat. Mens mediet inneholder glukose (dvs. D-glukose eller dextrose) ved en lav konsentrasjon på 0, 1%, holdes konsentrasjonen av sukrose og laktose høyt ved 1%.

Hvis bakteriene har evnen til å utnytte en eller flere av de tre sukkene, endres farge på mediet fra rød til gul. Hvis bakteriene har evnen til å produsere H 2 S, får mediet en svart farge. Som tre sukker og en jernforbindelse brukes i mediet, blir testen kalt trippel sukkerjernstest.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringsnål, autoklaver, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, trippel sukker jern (TSI) agar, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i TSI agar medium (som inneholder 3 sukkerarter og jern som hovedkomponentene) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og hvirvling (figur 7.7).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7, 4 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

3. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensrør (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. De blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå stilling for å avkjøle og størkne mediet for å få TSI-agar-skråninger.

8. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i skråene ved å stikke inn i rumpen og strekke på overflaten av skråene ved hjelp av en flamme-sterilisert nål. Nålen steriliseres etter hver inokulasjon.

9. De inokulerte skinnene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.

observasjoner:

1. Gul rødt og rødt skrå med eller uten gassproduksjon (brudd i agarskytten):

Syrestam og alkalisk skråstilling er blitt dannet. Her har bare glukose blitt brukt anaerobt (fermentativt) som gjør røret surt (gult). Ingen andre sukker har blitt brukt. Siden konsentrasjonen av glukose er mindre (0, 1%), blir den lille mengden syre produsert på den skrå overflate oksidert raskt og gjør den alkalisk (rød).

Videre produserer oksidativ dominans av pepton tilstede i mediet NH Y som gjør den skrå alkaliske (røde). Imidlertid opprettholdes sur tilstanden på grunn av redusert oksygentilførsel og langsommere vekst av bakteriene. Dermed er bakteriene glukose positive.

2. Gul rødt og gult skrå med eller uten gassproduksjon:

Syrestam og syreformet skive har blitt dannet. Her har laktose og / eller sukrose vært gjæret. Siden konsentrasjonen i mediet er høy, produserer de store mengder syrer som resulterer i sur skrå og sur stum og opprettholder den sure tilstanden. Dermed er bakteriene sukrose / laktose positiv.

3. Rød rump og rød skråkant:

Ingen av de tre sukkerene har blitt gjæret. I stedet har peptoner blitt katabolisert under anaerobe og / eller aerobiske forhold, noe som resulterer i en alkalisk tilstand på grunn av produksjon av ammoniakk.

Hvis bare aerob nedbrytning av peptoner oppstår, blir bare skrå overflaten alkalisk (rød). Hvis det er aerob og anaerob nedbrytning av pepton, blir både skrå og rødt alkalisk (rød). Dermed er bakteriene sukker negative.

4. Smerte av rumpa:

I tillegg til noen av de ovennevnte forholdene, dersom det oppstår svetting av butt, indikerer det at bakteriene er i stand til å produsere H2S ved å benytte det uorganiske svovel (natriumtiosulfat) som er tilstede i mediet.

H 2 S kombinerer med jernsulfatet i mediet for å danne svarte utfelter av jernsulfid, noe som resulterer i endring i fargen til mediet til svart. Dermed er bakteriene H2S positive.

5. Ingen blackening of butt:

Bakteriene er ikke i stand til å produsere H2S ved bruk av det uorganiske svovel (natriumtiosulfat) som er tilstede i mediet. Dermed er bakteriene H 2 S-negative.