Urease Test på bakterier for å finne ut deres evne til å hydrolysere urea (med figur)

Urease Test on Bacteria for å finne ut deres evne til å hydrolysere urea (med figur)!

Prinsipp:

Noen bakterier har evne til å hydrolysere (sammenbrudd i nærvær av vann) urea til NH3 og CO2, da de kan produsere enzymet 'urease'.

NH 3 er alkalisk (grunnleggende), på grunn av hvilket det øker pH-verdien som forandrer farge av fenolrød fra gul til rosa.

I urease-testen blir testbakteriene dyrket på agar-slanger som inneholder urea og fenolrød. Hvis bakteriene har evne til å hydrolysere urea, endres fargene på mediet fra gul til rosa. Noen bakterier kan produsere NH 3 ved å bryte ned peptonene i mediet. I slike tilfeller oppnås falskt positivt resultat.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrenner, laminærflytkammer, disponere krukke, inkubator, membranfiltreringsapparat, urea agar, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Fem testrør er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd (figur 7.15).

2. Ingrediensene av urea agar medium (inneholdende urea som hovedkomponent) eller dets ferdige pulver (unntatt urea) som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 90 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe av risting og virvling.

3. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 9 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

4. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

5. Kolben er bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. De fem prøverørene og den koniske kolben som inneholder urea agar (unntatt urea) steriliseres ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og får avkjøles i en stund uten at mediet kan størkne. Kjøling av mediet forhindrer kondensering og opphopning av vanndråper på skråningene. Hvis mediet allerede er utarbeidet og størknet under lagring, må det fortynnes ved oppvarming forsiktig til det smelter helt.

8. 20% ureaoppløsning fremstilles ved å oppløse 20 gram urea i 100 ml destillert vann og steriliseres ved membranfiltreringsapparat, fordi urea ikke kan steriliseres ved varme, idet det dekomponerer ved oppvarming.

9. 10 ml av den steriliserte ureaoppløsningen blandes aseptisk grundig med 90 ml av det steriliserte avkjølte flytende medium (flytende ved oppvarming).

10. Før det størkner, blir mediet i varm smeltet tilstand fordelt aseptisk i de 5 bomullspluggede steriliserte reagensrørene (ca. 20 ml hver).

11. Testrørene holdes i en skråstilling for å avkjøle og størkne mediet for å få urea-agar-skråninger.

12. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i skråene ved å stikke inn i rumpen og strekke på overflaten av skråene ved hjelp av en flamme-sterilisert nål. Nålen steriliseres etter hver inokulasjon.

13. De inokulerte skinnene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i en inkubator.

observasjoner:

1. Rosa farge produsert: Urease positiv.

2. Rosa farge ikke produsert: Urease negativ.