Voges-Proskauer-eksperiment på bakterier for å finne deres evne til å bruke glukose (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om Voges-Proskauer-testen (VP-testen) på bakterier for å finne ut deres evne til å bruke glukose med produksjon av acetylmetylkarbinol!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å bruke glukose og konvertere den til acetylmetylkarbinol (aceton), som er et nøytralt sluttprodukt.

Disse bakteriene metaboliserer i utgangspunktet glukose til pyruvsyre, som metaboliseres ytterligere via metabolisk mellomprodukteddiksyre til acetylmetylkarbinol (aceton) og C02 via 'butylenglykolveien'.

Acetylmetylkarbinol oksyderes til diacetyl i nærvær av a-naftol under alkalisk tilstand (40 prosent KOH). Diacetyl reagerer med guanidin-gruppen av kreatin (fra pepton brukt i kulturmediet) for å produsere rosa rosa farge.

I Voges-Proskauer-testen (VP-test) dyrkes testbakteriene i et kjøttmedium som inneholder glukose. Hvis bakteriene har evne til å benytte glukose med produksjon av acetylmetylkarbinol (aceton) som det nøytrale sluttprodukt, oppnår buljongen en rosa rosa farge ved tilsetning av a-naftoloppløsning fulgt av 40% KOH.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflammekammer, disponere krukke, inkubator, MR-VP-buljong (eller glukosefosfatbuljong), VP-løsning I (Barritt's reagensoppløsning A) og VP-løsning II (Barritts reagensløsning B), isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i MR-VP-kjøttmedium (som inneholder glukose som hovedkomponent) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og swirling (figur 7.5). Den buljong som brukes til metylrød test kan også brukes her. Vanligvis brukes samme buljong for både testene (MR og VP) samtidig.

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 9 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen er fordelt i fem reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørene blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Kjøttboksene får avkjøles til romtemperatur.

6. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyf sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

7. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 48 til 72 timer i en inkubator.

8. VP-løsning I (inneholdende a-naftol) blir droppet i buljongørene (0, 2 ml hver) og blandet grundig.

9. VP-løsning II (inneholdende KOH) ble droppet i buljongørene (0, 6 ml hver), blandet grundig og fikk stå i 30 minutter til 2 timer.

observasjoner:

1. Rosa rosa farge produsert: VP positiv.

2. Rosa rosa farge ikke produsert: VP negativ.