Nitratreduksjonstest på bakterier for å finne ut muligheten til å redusere nitrater

Les denne artikkelen for å lære om ytelsen av nitratreduksjonstest på bakterier for å finne ut deres evne til å redusere nitrater!

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å redusere nitrater, da de kan produsere enzymet 'nitratreduktase'.

Dette enzymet, i nærvær av egnet elektrondonor, reduserer nitrater (N0 ₃ ^- ) til nitritter (N0 ₂ ^- ). Tilstedeværelsen av N0 ₂ ^- indikeres av sulfanilsyre og a-naftylamin, som forandrer fargen til rød.

I nitratreduksjonstesten dyrkes testbakteriene i et kjøttmedium som inneholder nitrat (N0 ₃ ^- ). Hvis bakteriene har evne til å redusere nitrater, oppnår buljongen en rød farge ved tilsetning av sulfanilsyre og a-naftylamin.

Hvis rød farge ikke er produsert, indikerer det at enten N0 ₃ ^- ikke reduseres av bakteriene i det hele tatt, eller bakteriene produserer svært kraftig nitratreduktase enzym, som raskt reduserer N0 ₃ ^- utover N0 ₂ ^- til NH ₃ og N ₂ . For å bekrefte dette blir det tilsatt en liten mengde sinkstøv, noe som reduserer NO ₃ ^- hvis tilgjengelig i mediet, til N0 ₂ ^- og gir dermed rød farge.

Således, hvis rød farge er produsert, indikerer det at N0 ₃ ^- er tilstede i mediet uendret og bakteriene ikke har evne til å redusere nitrater. Hvis rød farge ikke er produsert, indikerer det at N0 ₃ ^- har blitt redusert utover N0 ₂ ^- til NH ₃ og N ₂ og bakteriene har evne til å redusere nitrater.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringssløyfe, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, disponere krukke, inkubator, nitratbuljong, sinkstøv, nitratreagens Løsning A, nitratreagens Løsning B, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene av nitratbuljongmedium (som inneholder nitrat som hovedkomponent) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml kjøttkraft, veies og oppløses i 100 ml destillert vann i en 250 ml konisk kolbe ved risting og virvling ( Figur 7.10).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 7.2 ved bruk av 0, 1N HCI hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre. Kolben oppvarmes, hvis nødvendig, for å oppløse ingrediensene helt.

3. Kjøttbøllen er fordelt i fem reagensrør (ca. 10 ml hver), bomullskoblet, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

4. Brothørene blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

5. Kjøttboksene får avkjøles til romtemperatur.

6. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i buljongen ved hjelp av en inokuleringssløyf sterilisert over bunsenflammen. Sløyfen steriliseres etter hver inokulasjon.

7. De inokulerte buljongrørene inkuberes ved 37 ° C i 48 timer i en inkubator.

8. 0, 5 ml hver av nitratreagensoppløsningen A (inneholdende sulfanilsyre) og nitratreagensløsning B (inneholdende a-naftylamin) tilsettes i hvert reagensrør, ristes godt og fargeendring observeres etter 15 minutter.