Citrate Utnyttelsestest for å kontrollere evnen til en bakterier til å utnytte sitrat som kilden til karbon

Sikt å utføre citratutnyttelsestest, for å finne ut om en bakteriers evne til å utnytte sitrat som eneste kilde til karbon.

Prinsipp:

Noen bakterier har evnen til å vokse i medier uten organisk C og N.

De kan benytte natriumcitrat som eneste kilde til C og ammonium dihydrogenfosfat (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) som den eneste kilden til N. De benytter NH ₄ H ₂ P0 _{4 for} å få N med produksjon av NH ₃, noe som øker pH resulterer i endring i fargen på bromtymolblått fra grønt (pH = 6, 9) til blått (pH over 7, 6).

I citratutnyttelsesprøven dyrkes testbakteriene på agar-skråninger som ikke inneholder organisk C eller N, som heller inneholder natriumcitrat, NH4H2P04 og bromtymolblått. Hvis bakteriene har muligheten til å benytte citrat som den eneste kilden til C, viser den veksten på skråningene. Den benytter også NH ₄ H ₂ P0 ₄ som den eneste kilden til N, noe som resulterer i en endring i fargene på glidene fra grønt til blått.

Materialer som kreves:

Testrør, konisk kolbe, bomullsplugger, inokuleringsnål, autoklav, bunsenbrenner, laminarflytkammer, kast beholder, inkubator, Simmons citratagar, isolerte kolonier eller rene kulturer av bakterier.

Fremgangsmåte:

1. Ingrediensene i Simmons citratagarmedium (inneholdende natriumcitrat, NH4H, P04 og bromtymolblått som hovedingrediensene) eller dets ferdige pulver som kreves for 100 ml av mediet, veies og oppløses i 100 ml destillert Vann i en 250 ml konisk kolbe ved å riste og hvirvle (Figur 7.6).

2. pH-verdien bestemmes ved bruk av pH-papir eller pH-meter og justeres til 6, 9 ved bruk av 0, 1N HC1 hvis det er mer eller ved bruk av 0, 1N NaOH hvis det er mindre.

3. Kolben oppvarmes for å oppløse agaret i mediet helt.

4. Før det størkner, fordeles mediet i varm smeltet tilstand i 5 reagensrør (ca. 20 ml hver).

5. Testrørene er bomullspluggede, dekket med håndflate og festet med tråd eller gummibånd.

6. De blir sterilisert ved 121 ° C (15 psi trykk) i 15 minutter i en autoklav.

7. Etter sterilisering fjernes de fra autoklaven og holdes i en skrå stilling for å avkjøle og størkne mediet for å få citrat agar-skråninger.

8. Testbakteriene inokuleres aseptisk, fortrinnsvis i et laminært strømningskammer, inn i skråene ved å stikke inn i rumpen og strekke på overflaten av skråene ved hjelp av en flamme-sterilisert nål. Nålen steriliseres etter hver inokulasjon.

9. Inokulerte skråninger inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i en inkubator.