7 Teknikker for observasjon av objekter under elektronmikroskop

Noen av de viktigste teknikkene som er vedtatt for observasjon av objekter under elektronmikroskop, er: (1) Skygge-støping (2) Negativ farging (3) Ultra-tynn snitting (4) Frysning (5) Lokalisering av cellestoffer (6) Lokalisering av enzymer (7) Autoradiografi.

(1) Skygge-avstøpning:

I skygge-støping tørkes den mikroskopiske gjenstanden i et spesielt rutenett plassert i en vakuumbeholder.

Et ekstremt tynt lag av metall (f.eks. Platina) blir avsatt på objektet fra et høyt oppvarmet filament i skrå vinkel, slik at gjenstanden gir en skygge på den ikke-belagte siden.

Undersøkelse av det skyggede bildet gir informasjon om formen på objektet (topografiske egenskaper på objektets overflate), som kan observeres ved skanningelektronmikroskop.

(2) negativ farging:

Denne teknikken følges for å observere små detaljer om svært små gjenstander, for eksempel virus og bakterier flagella. Et elektron-ugjennomsiktig materiale som fosfotungstinsyre eller dets salt får lov til å danne et lag tykt innskudd på overflaten av gjenstanden uten å komme inn i den. Når elektroner fra elektronpistolen til elektronmikroskopet ikke kan passere gjennom disse belagte overflatene, blir disse strukturer tydelig synlige.

(3) Ultra-tynn Seksjon:

En intakt mikrobiell celle er for tykk for å muliggjøre visualisering av sine interne fine strukturer under elektronmikroskop. For observasjon av de intracellulære fine strukturer, er cellen innebygd i en blokk av plastmateriale og skåret i ultra-tynne seksjoner (så tynne som 60 nm).

Den nøyaktige strukturen tolkes ved å observere flere ultra-tynne skiver som er delt på forskjellige nivåer og i forskjellige vinkler. Forbedring i kontrast av strukturer er mulig ved bruk av spesielle flekker, for eksempel uran og lantansalter.

(4) Fryse-etsing:

For å oppnå ultra-tynne deler av en gjenstand, må den løses ved kjemiske behandlinger. Slike kjemiske behandlinger resulterer i gjenstander. Disse artefakter blir overvunnet av fryse-etsing. I fryseetsing er prøven frosset inne i en blokk og er snittet, mens den fortsatt er inne i den i frossen tilstand.

(5) Lokalisering av cellekomponenter:

Det er en spesiell teknikk som utføres for å lokalisere kjemiske bestanddeler av celler. For eksempel, for å lokalisere et antigen i en celle, behandles en ultra-tynn del av cellen med et ferritin-merket antistoff som binder til antigenet for å danne ferritin-merket antistoff-antigenkompleks.

Da ferritin er en jernholdig substans med høy tetthet, påvirker antistoff-antigenkomplekset markant påvirkning av en elektronstråle, og derved frembringer en høy kontrast for klar observasjon under et elektronmikroskop.

(6) Lokalisering av enzymer:

Denne teknikken brukes til å lokalisere plasseringen av enzymer i celler. For eksempel, ved detektering av enzymet isocitrat dehydrogenase, fremstilles ultra-tynne seksjoner av bakterieceller. Deretter er kolloidalt gull festet spesifikt til enzymet, etter en immunokemisk teknikk. Det kolloidale gullfiksede enzymet kan observeres under elektronmikroskop.

(7) Autoradiografi:

Det er en cytokemisk teknikk hvor plasseringen av en bestemt kjemisk bestanddel i en gjenstand bestemmes ved å observere stedet, hvor et radioaktivt materiale blir plassert. Objektet blir først utsatt for det radioaktive stoffet for å tillate opptaket.

Deretter dekkes det med et lag av fotografisk emulsjon og holdes i mørket i noen timer. Den ioniserende stråling som utledes under forfall av stoffet, produserer latente bilder i emulsjonen. Etter fotografisk bearbeiding settes de utviklede bildene under elektronmikroskop som sølvkorn i preparatet.