Eksperiment på å utføre sur-fast-farging av bakterier

Forsøk på å utføre syrefast farging av en bakterie for å finne ut om det er surt eller ikke-surt!

Hensikt:

De fleste bakteriene kan bli farget, enten ved enkel grunnleggende farging eller ved gramfarging, da cellene deres tar opp flekker lett.

Noen bakterier har imidlertid en tykk voksaktig cellevegg laget av lipidmaterialer.

Slike bakterier er ekstremt vanskelig å bli farget, da vanlige vandige flekker ikke lett kan komme inn i deres celler, men en gang farget; det er like vanskelig å fjerne flekken ut av cellene sine, selv med kraftig bruk av syrealkohol som avfargingsmiddel. Disse bakteriene er farget med syrefast farging.

Således er syrefast farging, likt gramfarging, en differensiell fargemetode, som skiller bakterier, basert på naturen av deres cellevegg, i to grupper som følger:

(1) Syrefaste bakterier:

En bakterie, som er ekstremt vanskelig å bli flekket, men en gang farget, er det like vanskelig å fjerne flekken ut av cellene, selv med kraftig bruk av syrealkohol som avfaringsmiddel, er en syrefast bakterier (syre-kjærlig bakterie).

Eksempler: Mycobacterium spp. [M. tuberkulose (TB bakterier), M. leprae (spedalbakterier), M. smegmatis (naturlige bakterier av smegma) og M. marinum (TB bakterier av marine fisk). De har en tykk voksaktig cellevegg laget av lipidmaterialer.

(2) Ikke-syrefaste bakterier:

En bakterie, som er lett å være flekket og også er lett å avfarges av syrealkohol som avfargingsmiddel, er en ikke-syre-rask bakterie (ikke-syrlig-elskende bakterier). Eksempler: Alle bakterier unntatt Mycobacterium spp. I disse bakteriene er celleveggen ikke tykk og voksaktig.

Syr-rask farging er nyttig ved å differensiere syrefaste og ikke-syrefaste bakterier og også ved identifisering av bakterier tilhørende slekten Mycobacterium.

Prinsipp:

Den syrefaste bakterien er forskjellig fra de ikke-syrefaste bakteriene ved at de har en tykk voksaktig cellevegg laget av lipidmaterialer. Vanlige vandige flekker, som metylenblått eller krystallviolett, kan ikke komme inn i deres celler gjennom denne voksagtige celleveggen.

Men den røde fargede fenoliske primære flekken carbol fuchsin (karbolsyre eller fenol + basisk fuchsin); som er oppløselig i lipidmaterialene i celleveggen, kan komme inn i cellene sine gjennom cellevegget og kan beholdes inne i cellene som gir rød farge til dem.

Penetrasjon forsterkes ytterligere ved bruk av varme, som driver carbol fuchsin gjennom lipoidvegget inn i cytoplasma. (En liten modifikasjon av denne Ziel-Neelsen-metoden beskriver tilsetning av et fuktemiddel, Turgitol, til flekken, noe som reduserer overflatespenningen mellom cellevegg og flekk, og derved krever ingen oppvarming). Cellene får avkjøles for å herde den voksagtige celleveggen.

Når cellene blir utsatt for avfargingsmiddelet, syrealkohol, motstår de avfarging, da den primære flekken er mer løselig i de cellulære voksene enn i avfaringsmiddelet. Deretter kan det ikke komme inn i cellene gjennom voksaktig cellevegg når den er motfarget med metylenblå.

Dermed opprettholder endelig den syrefaste bakterien den røde fargen til den primære flekken og virker rød. På den annen side tar de ikke-syrefaste bakteriene opp den primære flekken lett og undergår avfaring lett. Når motfargede med metylenblå, tar disse fargeløse cellene også opp motfargene lett og virker blå, i motsetning til de syrefaste bakteriene, som virker røde.

Materialer som kreves:

Slide, sløyfe, primær flekk (karbol fuchsin), avfargingsmiddel (syre-alkohol), motflekk (metylenblå), varmeplate, buljong / skrå / platerkultur av bakterier, mikroskop, nedsenkning av olje.

Fremgangsmåte:

1. Et lysbilde rengjøres ordentlig under kranvann, slik at vann ikke forblir som dråper på overflaten (Figur 5.12).

2. Det vedleggende vannet tørkes ut med bibulous papir og lysbildet lufttørkes.

3. Et smear av bakterier fremstilles i midten av lysbildet i to metoder som følger.

(a) Hvis bakteriene vokst på agarplaten eller agarskråningen skal observeres, legges en dråpe vann i midten av lysbildet og en sløyfe av bakterier fra platen eller skråningen overføres til den ved en sløyfe som er sterilisert over flammen . Deretter, ved langsom rotasjon av sløyfen i dråpen, blir en bakteriesuspensjon laget og spredes til et smear er oppnådd.

b) Hvis bakterier som vokser i væskebuljong skal observeres, blir en dråpe av bakteriesuspensjonen plassert direkte i midten av lysbildet ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe og et smear blir fremstilt ved spredning.

4. Smøret er lufttørket.

5. Smøret er festet ved oppvarming. Oppvarming resulterer i koagulering av de cellulære proteiner, som følge av at cellene holder seg til glidoverflaten og ikke blir vasket bort under farging. Varmefiksering gjøres ved raskt å passere lysbildet høyt over en flamme 2-3 ganger, med smøreflaten vendt oppover, slik at smøret ikke blir oppvarmet.

6. Smøret er oversvømt med carbol fuchsin

7. Lysbildet legges på en varm kokeplate, slik at preparatet kan dampes i 5 minutter. Temperaturen på kokeplaten er justert slik at preparatet ikke kokes og fordampes raskt. Fordampetapet er påfyllt, slik at smøret ikke tørker opp. (For varmeløs metode blir smeten oversvømmet i 3-5 minutter med carbol fuchsin som inneholder Turgitol).

8. Glideren fjernes fra kokeplaten og avkjøles.

9. Overflødig flekk vaskes vekk fra smøret under forsiktig vann fra springen, slik at vannet ikke faller direkte på smeten.

10. Avfargingsmiddelet, syrealkohol, blir tilsatt på smøremiddelet, til karbol fuchsin ikke vaskes fra smeten.

11. Syrealkoholen vaskes bort fra smøret under forsiktig strømning av vannet, slik at vannet ikke faller direkte på smøret.

12. Smøret er oversvømmet med motfargene, metylenblått i 2 minutter.

13. Overflødig flekk vaskes bort fra smøret under forsiktig vann fra springen, slik at vannet ikke faller direkte på smeten.

14. Lysbildet blottes tørt med bibulous papir.

15. Lysbildet er klippet til mikroskopets stadium og smøret observert under lavt og høyt tørrmål.

16. En dråpe neddykkingsolje legges på smeten.

17. Smøret er observert under olje-nedsenkingsmål.