Hvordan å utføre kapsel farging av en bakterier

Sikt å utføre kapselfarging av bakterier, for å observere bakteriekapsel.

Hensikt:

I noen bakterier er cellevegget omgitt av en viskøs cellehylse kalt "kapsel". Den er laget av polysakkarid, glykoprotein eller polypeptid.

Når kapselen er for tynn til å bli observert under lysmikroskop, kalles den "mikrokapsel" og når den er så tykk at mange celler er innebygd i kapsellamrisen; det kalles "slime".

Basert på nærvær eller fravær av kapsel, er bakterier av to typer som følger:

(1) kapsulerte bakterier:

En bakterie, som har kapsel, er en kapslet bakterie.

(2) Ikke-kapslede bakterier:

En bakterie, som ikke har kapsel, er en ikke-kapslert bakterie

Formålet med kapselfarging er å observere bakteriekapsel ved å skille mellom kapselmateriale fra bakteriecellen.

Prinsipp:

Ved kapselfarging er det smurt av bakterier i midten av et lysbilde. Det er ikke varmefast, da cellekrempingen forårsaket av oppvarming kan skape en klar sone rundt cellen, noe som kan være feil som kapsel.

Videre, ettersom kapselmaterialet er vannløselig og kan vaskes bort med kraftig vasking, blir bare to reagenser anvendt ved flekker uten mellomliggende vannvasking. En av de to reagensene er den primære flekken, krystallfiolett. Den gir mørk lilla-blå farge til både cellen og kapselen.

Imidlertid blir den "absorbert" i cellen på grunn av den ioniske naturen til de cellulære komponentene, mens den ganske enkelt "klæber" til kapselen på grunn av den ikke-ioniske natur av kapsummaterialet. For å forhindre utladning av kapselmaterialet, er smeten ikke vannvasket.

Det andre reagenset, kobbersulfat virker både som et avfargingsmiddel og en motfarging. Det avfarmer ved å fjerne overflødig krystallviolett fra rundt cellene, så vel som krystallvioletten festes til kapselen. Det motvirker også kapselen og gir en lyseblå farge til den. Kapseln vises nå lyseblå, mens cellen ser dyp lilla blå ut.

Materialer som kreves:

Slide, loop, nedsenking olje, mikroskop, krystallfiolett flekk, kobbersulfatløsning (20%).

Fremgangsmåte:

1. Lysbildet rengjøres ordentlig under vann fra springen, slik at vann ikke forblir som dråper på overflaten (Figur 5.14).

2. Det vedleggende vannet tørkes ut med bibulous papir og lysbildet lufttørkes.

3. Et smear av bakterier fremstilles i midten av lysbildet i to metoder som følger.

(en) Hvis bakterier vokst på agarplaten eller agarskråningen skal observeres, settes en dråpe vann i midten av lysbildet, og en sløyfe av bakterier fra platen eller skråningen overføres til den ved en sløyfe som er sterilisert over flammen. Deretter, ved langsom rotasjon av sløyfen i dråpen, blir en bakteriesuspensjon laget og spredes til et smear er oppnådd.

(B) Hvis bakterier vokst i væskebuljong skal observeres, blir en dråpe av bakteriesuspensjonen plassert direkte i midten av lysbildet ved hjelp av en flamme-sterilisert sløyfe og et smear blir fremstilt ved spredning.

4. Smøret er lufttørket. Ingen varmefiksering gjøres fordi den resulterende cellekrempingen kan skape en klar sone rundt bakteriene, noe som kan være feil som kapsel.

5. Smøret er oversvømmet med den primære flekken, krystallfiolett, i 5-7 minutter.

6. Smøret er vasket med 20% kobbersulfatløsning. For å forhindre utladning av kapselmaterialet, er smeten ikke vannvasket.

7. Lysbildet blottes tørt med bibulous papir.

8. Lysbildet er klippet til mikroskopets stadium og smøret observert under lavt strøm og høyt tørrmål.

9. En dråpe neddykkingsolje blir satt på smeten.

10. Smøret er observert under olje-nedsenkningsmål.