Arbeidsprinsipp for fluorescensmikroskop (med figur)

Les denne artikkelen for å lære om arbeidet med fluorescensmikroskop!

Arbeidsprinsipp:

Mange stoffer absorberer lys. Men noen av dem, etter å absorbere lys av en bestemt bølgelengde og energi, avgir lys med lengre bølgelengde og mindre energi.

Slike stoffer kalles "fluorescerende stoffer".

Anvendelse av dette fenomenet er grunnlaget for fluorescensmikroskop. I praksis er mikrober farget med et fluorescerende fargestoff og deretter opplyst med blått lys. Fargen absorberer blått lys (kortere bølgelengde) og gir grønt lys (lengre bølgelengde).

I et fluorescensmikroskop brukes en høy-intensitets kvikksølvbue-lampe som lyskilde (figur 4.11). Den avgir hvitt lys, som sendes gjennom et "exciter filter". Det tillater bare den blå komponenten i det hvite lyset (det hvite lyset består av syv farger, som i den synkende rekkefølgen av bølgelengden er fiolett, indigo, blå, grønn, gul, oransje og rød) for å passere gjennom den og blokkerer alle andre fargekomponenter.

Et dikroisk speil, som reflekterer blått lys, men tillater grønt lys brukes på stien til det blå lyset. Speilet er festet i en slik vinkel at det blå lyset reflekteres nedover til prøven.

Prøven er tidligere farget med et fluorescerende fargestoff, slik som akridinorange NO, akridingult, akriflavin, tioflavin S, tioflavin T eller titangult G. Visse deler av prøven beholder fargestoffet, mens andre ikke gjør det. Delene, som holder det fluorescerende fargestoffet, absorberer blått lys og avgir grønt lys. Det utgitte grønne lyset går oppover og går gjennom det dikroiske speilet. Den reflekterer tilbake blått lys, om noen, og tillater kun grønt lys å passere gjennom.

Så når lyset et "barrierefilter". Det tillater grønt lys å passere til øyet og blokkerer alt gjenværende blått lys fra prøven, som kanskje ikke har blitt fullstendig reflektert av det dikroiske speilet.

Således oppfatter øyet de fargede partiene av prøven som et glødende grønt objekt mot en strålesvart bakgrunn, mens de ufarvede delene av prøven forblir usynlige.